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免疫组化中抗体选择要求

更新时间:2024-04-26   点击次数:418次

1、一抗选择


(1)选择单克隆还是多克隆抗体。


       由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体,单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合,就像导-弹精确地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对较小,检测抗原灵敏度相对较低,而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。


(2)种属来源。


       家兔来源的抗体多是多克隆,而小鼠来源的抗体多是单克隆,但也有例外。根据此来源选择相应的二抗。


(3)种属反应性的选择。


       这一点很重要,表明这种抗体可能存在种属差异,且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。


(4)能否做免疫组化。


       一抗说明书都会注明做WB、IHC、ICC、IF等,建议选择注明的抗体(经过文章证明)。


(5)检测标本类型。


      用于检测石蜡切片还是冰冻切片,一般能做石蜡切片的抗体,都可用来检测冰冻切片,但能做冰冻切片的抗体,不一定能检测石蜡切片中的抗原。


2、二抗选择


(1)种属来源。


       主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。


(2)标记物的选择。


       有HRP、Biotin、荧光素等标记物,一般SP三步法二抗选择Biotin标记为二抗,与后面的SP结合反应;而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗,如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。(这主要与后面有无三抗和三抗种类有关)。


(3)选择IgM还是IgG。


      一抗是IgM,二抗就选择IgM;反之,一抗是IgG,则二抗选择IgG。