对所谓"试剂空白""样本空白""水空白""杯空白"等"空白"名词,下面和大家解释说明一下:
1、试剂空白:
由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度,所以从理论上来讲,所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除(试剂本身的吸光度就是试剂空白)。在传统手工法中,每次测定至少做三个管:测定管、标准管、空白管,其中空白管是试剂加蒸馏水,测出来也就是试剂空白。因为操作环境、仪器状态、试剂稳定性等变异,所以要求每次都要测定试剂空白,称为实时试剂空白。
在全自动分析仪上,大都是模拟手工操作,许多全自动分析仪为追求速度,在设计上采用折中方法来测定试剂空白。以日立全系列生化仪为例,该系列分析仪做不了实时试剂空白,因为它们全是先加样本后加试剂,为了折中,在定标时做一个试剂空白,保存起来,需要扣除试剂空白时再减这个预先保存的值。对于日立的这种试剂空白测定很多仪器都采用这种方法,也叫做试剂空白校准。
在自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度,该吸光度是通过校准确立的。
2、样本空白:
由于溶血、脂血、黄疸等情况,会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本身吸光度的测量,即样本空白,可以去除这方面的影响,测量方法是按照正常测试的试剂和样本量,把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。自动生化仪上,很难界定样本空白。与消除样本空白有关的大约有如下几点:
①在双试剂测定时,加入试剂和样品后的吸光度可一定程度上扣除样本空白。(故有单试剂不能扣除样本空白的说法)。
②现在的试剂抗干扰能力都较强,比如双试剂,R1加入后先和样本孵育一段时间,将血红蛋白、脂肪、胆红素等反应掉,再加入R2开始测定反应,在一定范围内都可以消除样本空白。
③现代全自动生化仪大多采用双波长测定,双波长测定的原则是根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征,选择两个波长和,使干扰组分在这两个波长处的吸光系数相等,使待测物质在两波长处的吸光系数有显著差别。以两波长分别测定分析溶液的吸光度, 以两个吸光度值之差(△A)计算。这也可以扣除一部分样本空白。
④有些仪器,例如日立系列,有“血清信息"功能的设置,做法单独占用一个空白通道来计算,叫做样品空白校准。
3、水空白:
比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意义主要是对光路系统进行检查和校正,如光源,比色杯等,同时在计算中起到消除“杯差"的作用。日立7060中的Cell Blank(杯空白)测定的就是水空白。