羟脯氨酸(Hyp)检测原理说明
（ 测培养细胞，培养液）
一、原理 羟脯氨酸在氧化剂的作用下所产生的氧化产物与二甲氨基苯甲醛作用呈现紫红色，
根据其呈色的深浅可推算出其含量。 二、试剂盒组成与配制：
1、试剂一：粉剂×2 瓶，甲液 10ml×2 瓶，乙液 20ml×2 瓶，临用时取粉剂一瓶，先加 甲液混匀 10ml 充分溶解（从瓶口向内看，*溶解完）。然后再加乙液 20ml 充分混匀。配好后的试剂 4℃~8℃冰箱保存。
注意点：粉剂加甲液 10ml 后一定一定要*溶解后才能加乙液。
2、试剂二：液体 60ml×1 瓶，4℃冰箱避光保存。
3、试剂三：粉剂×1 支，溶剂 60ml×1 瓶，临用时将粉剂一支加到 60ml 溶剂中充分溶解， 配好后 4℃避光保存。
4、试剂四：羟脯氨酸标准品 5mg×3 支，4℃冰箱保存。
标准贮备液的配制：测试前将一支标准品用蒸馏水溶解后定溶至 50ml，配成 100μg/ml 的标准贮备 液。
2μg/ml 标准应用液的配制：取 100μg/ml 的标准贮备液 0.2ml 加蒸馏水定溶至 10ml，配成 2μg/ml
的标准应用液，现用现配。
5、消化液：粉剂×1 瓶，溶剂 3ml×1 瓶，4℃冰箱保存。临用前将粉剂倒入溶剂中，并 用溶剂将粉剂瓶洗干净，现用现配。
*注意：混匀时用双手小心旋动小瓶，切勿上下颠倒混匀，以免引起大量气泡。
三、操作步骤：
1、样本前处理：（血清及体液可直接进行检测，组织则需制成匀浆后检测。） 组织块称重，放在匀浆管口部，用小剪刀剪碎，加入 9 倍生理盐水冲入匀称管
中，缓慢上下旋转研磨，每次半分钟，间隔半分钟，反复 5 次或者用匀浆机，匀浆时间
10 秒/次，间隔 30 秒，连续 3~5 次，在冰水中进行。匀浆后以 3500 转/分离心 10 分钟， 取上清 0.1ml 加 0.4ml 生理盐水，稀释成 2%的组织匀浆进行检测，或者取 0.05ml 10%匀 浆加生理盐水 0.45ml 制备成 1%匀浆，请做预试后再确定匀浆浓度。（详见实验方法学）。
2、消化：
空白管 | 标准管 | 测定管 | |
双蒸水（ml） | 0.25 | ||
2μg/ml 标准应用液 （ml） | 0.25 | ||
检测液（ml） | 0.25 | ||
消化液（ml） | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
3、羟脯氨酸测定：
混匀，37℃水浴 3 小时
试剂一（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀，室温静置 10 分钟
试剂二（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
混匀，室温静置 5 分钟
试剂三（ml） | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
混匀，60℃水浴 15 分钟，流水冷却后，3500 转/分离心 10 分钟，取上清（注
意不要混入下面沉淀）在 550nm 处，1cm 光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。
注意：若您的样本中所含羟脯氨酸过低，可以增加您的样本取样量或增加匀浆浓度。
4、蛋白定量。
四、计算与举例：
1、公式：
如需详细的检测说明原理，请下载资料，同时我司客服人员，我们会为你提供的产品与技术服务
咨询电话