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ELISA技巧学习很重要
点击次数:191 发布时间:2018-11-07

    ELISA试剂盒实验经验是需要操作者们自身积累的,但是掌握了实验技巧之后可对实验的学习与操作事半功倍。ELISA技巧学习很重要!下面一起来看看上海恒远生物公司今天给大家带来了哪些实验技巧内容:


    抗原抗体反应要求在适比例条件下进行,ELISA反应试剂多,其工作浓度不同对结果影响较大,因此必须对包被抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)进行zui佳工作浓度的滴定和选择,以达到zui佳的测定条件。


    (一)方阵(棋盘)滴定法选择包被抗原的工作浓度:
    用包被液将抗原作一系列稀释(1:50~l:800)后,按行进行包被、洗涤。按列分别加入用稀释液1:100稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照),保温,洗涤。加工作浓度酶标抗体,洗涤,加底物显色,加酸终止反应后读取A值。选择强阳性参考血清A值;为0.8左右,阴性参考血清A值<0.1的包被抗原稀释度为工作浓度。


    (二)方阵(棋盘)法选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度:
    将抗体用包被液稀释为10mg/L、lmg/L、0.1mg/L三个浓度按行包被,每一个浓度包被三行(每行3孔),分别在每个浓度包被的、二、三行中分别加入强阳性抗原,弱阳性抗原和阴性对照,将酶标抗抗体用稀释液稀释为1:l 000、l:5000、l:10000三个浓度,分别加入每个浓度包被的、二、三列中。加底物显色,加酸终止反应,分别读取A值。以强阳性抗原液A值在0.8左右,阴性参考A值<0.1的条件为适条件。据此选择包被抗体和酶标抗体的
zui佳工作浓度。
       
    抗体的稀释度包括特异性抗体,中间抗体及标记抗体。任何一种免疫组化方法要想得到令人满意的染色效果,必须将抗体进行
zui佳稀释。一般来说,抗体的稀释度取决于下列因素。 
    1.抗体的浓度(亦称滴度)
    每毫升溶液内所含抗体分子越多,滴度就越高,该抗体可高度稀释,尤其是特异性一抗的稀释度。一般商品化抗体只知道每毫升含多少抗体蛋白量,不知道所含抗体分子。自己制备抗体可通过琼脂糖双扩散或放射免疫法进行测定。商品化抗体一般告知大约的稀释度,例如用PAP法可1:100~1:200稀释。但往往购买到一种新抗体后,需要利用组织切片进行
zui佳稀释度的测定。  
    2.抗体的配制
    抗体的配制及使用是开展免疫组织化学工作的一个重要环节,其检测的结果既要可靠,又要能重复,这就要求实验人员在配制抗体过程中要注意其度。目前,随着抗体稀释液的稳定性提高,一次稀释抗体可用一年。当然,还可以购买到商品化即用型一抗,使用非常方便。 
    3.抗体稀释液的种类
    可根据需要选择不同的抗体稀释液。如稀释当天用完的一抗,用0.05m01/L(pH7.6)TBS即可。如需长期保存,可用如下稀释液:取0.1g明胶(或绿色明胶)溶在100ml0.05m01/L(pH7.6)TBS缓冲液中,边搅拌边加热至60℃,待完全溶解后,冷却至室温,加入1g牛血清白蛋白,后加入200mg aN3,分装保存在一40℃中备用。另外,抗体原液应分装后一40℃保存,可保存5年以上。
       
    ELISA试剂盒应保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。上海恒远生物公司提醒您:从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。咨询采购高品质进口/国产ELISA试剂盒,欢迎您致电联系我公司业务员。

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