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鹅圆环病毒抗体(CV Ab)ELISA试剂盒-定性

更新时间:2022-10-24

简要描述:

鹅圆环病毒抗体(CV Ab)ELISA试剂盒-定性本试剂盒用于定性测定鹅血清,血浆及相关液体样本中圆环病毒抗体(CV Ab)。

型号:点击量:1129

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实验原理

本试剂盒采用间接法测定标本中鹅圆环病毒抗体(CV Ab)。用纯化的抗原包被微孔板,

制成固相抗原,与样品中圆环病毒抗体(CV Ab)温育后,加入生物素标记的抗 IgG 抗体,

再与链霉亲和素-HRP 结合,形成免疫复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在

HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长

下测定吸光度(OD 值),与 CUTOFF 值相比较,从而判定标本中鹅圆环病毒抗体(CV Ab)

的存在与否。


标本要求

1.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

操作步骤

1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1

2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先

加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不

触及孔壁,轻轻晃动混匀,37℃温育 45 分钟。

3. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

重复 4 次,拍干。

5. 加生物素标记的抗-IgG 抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG 抗体 50μl。37℃温育 30 分

6. 洗涤:操作同 4。

7. 加链霉亲和素-HRP:每孔加入 50μl 的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育 30

分钟。

8. 洗涤:操作同 4。

9. 显色:每孔先加入显色剂 A 50μl,再加入显色剂 B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

结果判定:

试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20

临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定:样品 OD 值< 临界值(CUT OFF)者为圆环病毒抗体(CV Ab)阴性

阳性判定:样品 OD 值≥ 临界值(CUT OFF)者为圆环病毒抗体(CV Ab)阳性

注意事项

1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为 630nm

7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须

注意安全。

规格:

96 人份/盒

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 个月

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