鹅圆环病毒抗体（CV Ab）ELISA试剂盒-定性

实验原理

本试剂盒采用间接法测定标本中鹅圆环病毒抗体（CV Ab）。用纯化的抗原包被微孔板，

制成固相抗原，与样品中圆环病毒抗体（CV Ab）温育后，加入生物素标记的抗 IgG 抗体，

再与链霉亲和素-HRP 结合，形成免疫复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在

HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长

下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中鹅圆环病毒抗体（CV Ab）

的存在与否。

标本要求

1．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

操作步骤

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1

孔

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先

加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不

触及孔壁，轻轻晃动混匀，37℃温育 45 分钟。

3. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 4 次，拍干。

5. 加生物素标记的抗-IgG 抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG 抗体 50μl。37℃温育 30 分

钟

6. 洗涤：操作同 4。

7. 加链霉亲和素-HRP：每孔加入 50μl 的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育 30

分钟。

8. 洗涤：操作同 4。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50μl，再加入显色剂 B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为圆环病毒抗体（CV Ab）阴性

阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为圆环病毒抗体（CV Ab）阳性

注意事项

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须

注意安全。

规格：

96 人份/盒

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 个月