总抗氧化能力(T-AOC）试剂盒（FRAP 法）

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理：

在酸性环境下，抗氧化物质还原 Fe³⁺-三吡啶三吖嗪(Fe³⁺-TPTZ)产生蓝色的 Fe²⁺-TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。

自备实验用品：

恒温水浴锅、低温离心机、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 120mL×1 瓶，使用前预冷。

试剂一：液体 20 mL×1  瓶，避光保存。

试剂二：液体 2 mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 2 mL×1 瓶，避光保存。

混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，使用前 37℃预温。

样品的制备：

(1)血清、血浆、唾液或尿液等液体样品

血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA   抗凝）4℃，5000rpm  离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30 d）后再测定。

(2)组织样品

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

(3)细胞样品

按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

操作步骤：

1、酶标仪预热 30min，调节波长至 593nm。

2、操作表

注意：空白管只需测定一次，若测定管吸光值大于 1.5 则需要用提取液稀释。