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小鼠I型胶原C端肽(CTX-1)ELISA试剂盒

更新时间:2022-08-30

简要描述:

【产品名称】:中文名称:小鼠I型胶原C端肽(CTX-1)ELISA试剂
【包装规格】:96T/盒
【预期用途】:仅供科研使用,本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中小鼠I型胶原C端肽(CTX-1)的表达。

型号:点击量:307

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1.样本类型和采集:

血清将收集于血清分离管的全血标本在室温放置0.5-2小时或4过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20-80保存,但应避免反复冻融。
 血浆EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20-80保存,但应避免反复冻融。

组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mLPBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融

细胞裂解液: 吸弃培养液,用PBS(0.01 M,pH 7.4)将细胞洗一遍。用细胞刮刮下细胞,加入2-5 mL PBS(0.01 M,pH 7.4)。悬浮细胞可省略。收集细胞悬液,4℃ 1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的PBS润洗3次。加入适量的预冷PBS或非变性细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞,通常6孔板一个孔的细胞量需要150-250μL PBS重悬。 将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融3次,使细胞充分裂解,也可将样品进行超声破碎,以达到裂解的目的。4℃ 10000×g 离心10min,除去细胞碎片,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融

细胞培养物上清或其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2.样本保存和稳定性

样本在2-8条件下,可以储存72h,在- 20℃-80℃可以储存6个月及以上。样本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融。

步骤:

1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同

2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟  

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外

7. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟

8. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10-20分钟。

10.终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意:

1. 试剂准备:试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用。准备一次实验所需要的酶标条,其它的可从微孔板上拆下,密封,按照说明书要求保存,以备下次使用。

2. 加样:实验操作中请使用一次性的灭菌吸头,避免污染。加样时注意不要有气泡产生,将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。与反应试剂加入一样,加样过程中第一个孔与最后一个孔加样时间间隔尽量小(一般控制在10 分钟以内),如果太大,将会导致不同的“预温育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。为了测值的准确性,推荐设置复孔进行实验。

3. 温育:为防止样品蒸发,实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内,以避免液体蒸发,洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态,同时应严格遵守给定的温育时间和温度。

4. 洗涤:浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。充分洗涤非常重要,在每次洗涤过程中,都要将洗涤液*甩干。洗涤过程中反应孔内残留的洗涤液应在吸水纸上拍干,勿将吸水纸直接放入反应孔中吸水,同时要轻轻擦除板底残留的液体和手指印,避免影响最后的酶标仪读数。如果使用自动洗板机,请在熟练使用后再用于正式实验过程中。

5. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如观察到颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强而影响酶标仪光密度读数。

6. 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。


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