实验前的准备工作是非常重要的,操作者需要在实验开始之前将所需材料准备齐全。在ELISA试剂盒操作中,像蒸馏水、加样器、振荡器、磁力搅拌器等材料需自备,今天上海恒远来和您说说这其中*的九种试剂:
1. 稀释液
2. ABTS使用液
3. 抗原、抗体和酶标记抗体
4. 正常人血清和阳性对照血清
5. 终止液(2M H2SO4)
6. 底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸)
7. 包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液)
8. 洗涤缓冲液(PH7.4 PBS):0.15M
9. TMB(四甲基联苯胺)使用液
上面说的九种试剂是试剂盒之外的,试剂盒内的洗涤缓冲液(50×)需要蒸馏水50倍稀释,标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
0 pg/ml | 空白对照 | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul |
12.5 pg/ml | 1号标准品 | 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
25 pg/ml | 2号标准品 | 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
50 pg/ml | 3号标准品 | 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
100 pg/ml | 4号标准品 | 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
200 pg/ml | 5号标准品 | 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 |
400 pg/ml | 6号标准品 | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul |
ELISA是一种免疫测定,应用免疫学技术测定标本的方法。可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液、分泌物和排泄物等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行ELISA试剂盒操作测定,有些则需经预处理。