今日上午上海恒远生物科技有限公司的一位多年老客户吴老师来电给我公司订购白介素6试剂盒，在咨询的过程中吴老师说：“还记得我*次实验的时候，那时候什么都不懂，也不知道找你们的。再想想现在，实验做的多了自然就熟练了，也不会那么容易出错了。其实现在想想，只要在ELISA的每个环节都能细心做好，稍加注意就能做出很不多的实验了”
· 选择试剂
选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
· 加样
| 出错的可能原因 |
| 血清或血浆标本分离不好即进行加样。 |
| 手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时。 |
| 加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。 |
| 解决办法 |
| 标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟;若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。 |
| 加样后及时放入孵箱。 |
| 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 |
| 如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 |
| 标本较多时，请分批操作。 |
· 孵育
| 可能原因 | 解决办法 |
| 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*。 | 贴封片或加盖。 |
| 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。 | 按说明步骤严格控制操作时间。 |
· 洗板
| 可能原因 |
| 采用手工洗板，孔与孔之间液体交叉。 |
| 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不*;洗板针堵塞，抽吸不*;洗板不畅，导致洗板效果差。 |
| 反应板过多造成洗板等待时间长。 |
| 解决办法 |
| 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干。 |
| 合理安排，或多用几台洗板机。 |
· 显色
· 终止
可能原因如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
· 读板
如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。
其实我们在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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