填补Qiagen空白的植物RNA提取试剂盒

 填补Qiagen空白、不用DNA酶消化的植物RNA提取试剂盒
一般公司多糖多酚植物RNA提取试剂盒失败原因和解决方案
很多植物RNA的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分，造成RNA提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更 加复杂。手工的CTAB类的方法提取因为时间太长，太繁琐，手工方法不在讨论之列。一直以来没有一款好的试剂盒包括qiagen、promega等进口试 剂盒也无法满足科研工作者对植物RNA提取的要求。
下面我们来分析一下植物RNA为什么不能提取成功的原因：
市面上zui常见的RNA提取试剂盒无非是两种：*种：TRIzol改良类方法（包括溶液型的和离心柱型的）、第二种：直接裂解过柱子的方法（离心柱）
*种试剂盒失败的原因1：RNA市面上面zui流行的方法就是TRIzol，或者TRIzol改良，或者TRIzol加离心柱一类的改良方法。 TRIzol也就是异硫*酸胍/苯酚/氯仿原理一步法的方法的对象是动物源性的组织细胞，针对普通多糖多酚低的植物性的材料，TRIzol类原理产 品也可以提取。但是多糖、多酚、次级代谢产物丰富的情况下，TRIzol类方法无法防止多糖多酚对于RNA/DNA分相的干扰，要么残留大量DNA，要么 残留大量多糖、多酚或者次级代谢产物，氧化破坏RNA，或者残留这些多糖多酚，色素代谢产物等抑制下游的反转录等反应。限于技术水平的限制，市面上绝大多 数的国产厂家是使用TRIzol的方法进行改良，无论是不是加了离心柱。但是实践证明，改良不能从根本上解决问题。判断是否试剂盒使用这种改良的方法非常 简单：是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯仿，如果使用到了氯仿就是TRIzol方法的改良。
第二种试剂盒失败的原因：直接裂解过柱子的方法是目前的方法，但是也是技术含量zui高的方法。这个方法采用裂解液（不含苯酚，氯仿）直接裂 解，RNA/DNA同时过柱子，然后在柱子上面直接分离RNA/DNA，所以，这种方法的优点*在于，避免了使用trizol在多糖多酚下不能成功分离 RNA/DNA的弊端、第二在于，不使用有毒的苯酚氯仿。但是正是因为其技术先进，所以难度很高，国内厂家包括进口公司有两个技术难点一直没有突破。第 一，裂解液的成分必须针对去除多糖多酚进行研发添加去多糖多酚，代谢产物成分。否则会同样碰到多糖多酚干扰提取的问题。第二、和TRIzol原理不同，直 接过柱法DNA/RNA同时加到吸附柱上去。如何去除DNA是*个难点。否则会残留大量DNA。两个技术难点的没有掌握导致了国内公司包括的第二种试剂 盒失败。国外公司因为没有掌握*难点，裂解液里面没有去除多糖多酚成分，所以包括Qiagen的RNeasy plant mini kit盒子也常常不能成功提取较复杂植物RNA样品如黑加仑、冬青等植物样品。
上海恒远的研发人员经过3年的不断研发改良，针对多糖多酚植物的特点，和这两种试剂盒失败的原因，开发出了世界水平的RN09 EASYspin植物RNA快速提取试剂盒，*：采用直接过柱子方法，*抛弃了TRIzol苯酚，氯仿原理方法，使用无毒原料，并且添加了有自主知识 产权的去除多糖多酚成分解决了多糖多酚和代谢产物对于RNA的破坏和干扰分离。第二：突破了直接过柱子的方法DNA去除的技术难点，解决了DNA残留过多 问题。经过实践过程中，几十种国内外试剂盒包括Qiagen的RNeasy mini kit 提取失败的例子，包括棉花苹果等试剂盒不易提取的样品，使用上海恒远的EASYspin植物RNA提取试剂盒，20分钟可以轻松提取，不需要液氮， 无苯酚氯仿。高质量的RNA可以成功完成下游反应试验。第三：实践过程中我们发现，部分复杂植物或者DNA含量特别丰富的植物样品使用Qiagen的 RNeasy plant mini kit 会有明显残留。尝试北京艾德莱的RN09 EASYspin植物RNA快速提取试剂盒也一样有明显残留。对此问题Qiagen并没有提供的解决方案。Qiagen只是建议使用传统的DNA酶消 化的方法来解决，但是*DNA酶消化的方法非常繁琐，费时间，消化后要回收，效果不好，还常常降解RNA，让人望而生畏，而且成本高昂，单单 Qiagen的配套DNA酶柱上消化试剂盒就要1100元/50次，如果还要使用RNA清洁纯化回收DNA酶消化后的盒子就更昂贵了。近年来北京艾德莱又 投入大量研发人力物力，终于*并且推出RN38 EASYspin plus 植物RNA提取试剂盒解决了DNA残留问题，该试剂盒使用基因组DNA清除柱子，配合*研发的溶液，不需要DNA酶消化，操作简单仅需增加10秒钟清除 基因组DNA残留的步骤，不用苯酚，氯仿，30分钟完成全部试验过程。我们测试的几种植物样品中均已经获得成功，使用Qiagen的RNeasy plant mini kit 和我们RN09 EASYspin 植物RNA提取试剂盒有残留DNA的样品种类使用这款RN38 EASYspin plus 植物RNA提取试剂盒后，均无DNA残留。
部分成功样品：
棉花、海棠、黑加仑、烟草、拟南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季、蔷薇、沙棘、冬枣、芦荟、仙人掌、报春花、水稻、玉米、唐菖蒲、樱桃、白玉 兰、毛白杨、樱花、葡萄、百合花、紫菜、绿藻、香蕉、水仙花、青花菜、地被菊、苹果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苎麻等等，其中qiagen无法提取的黑加 仑、promega无法提取的海棠等、均可用该产品成功提取。
推荐：上海恒远的RN09 EASYspin 植物RNA提取试剂盒为*产品，世界水平，不使用苯酚，氯仿有毒性物质，采用离心柱型操作，添加有自主创新的多糖多酚去除成分，是多糖多酚样品的特 效产品，不需要液氮，20分钟内得到高质量RNA。成功提取Promega无法提取的海棠叶片、Qiagen无法提取的黑加仑等样品。是国产试剂赶超世界 较高水平的一个典型例子。同时上海恒远推出的RN38 EASYspin Plus植物RNA提取试剂盒进一步解决了Qiagen的RNeasy plant mini kit 部分植物样品残留大量DNA污染的问题，采用了的方法10秒钟解决残留问题，是上海恒远核酸分离技术遥遥的又一个里程碑，处于世界水平。