用免疫磁珠做细胞分选(MACS)是简捷的免疫细胞及其它细胞的分离纯化方法。
原理是已包被一抗的磁珠与细胞表面相应分子特异性结合,或者已包被二抗(羊抗小鼠或羊抗大鼠)的磁珠与预先已与细胞表面分子特异结合的一抗结合。磁珠携带与之结合的细胞吸附于分离柱/试管上,实现阳性细胞分离或阴性细胞的分离。本节介绍超微磁珠间接标记、用分离柱阳性分选细胞的方法。
Protocal:
1.离心收集待分离细胞,用少量PBE孵育液(0.5%BSA、0.08%EDTA PH7.2 PBS,真空抽滤除菌及液体内气体)充分混悬细胞(0.5ml/1×108细胞),加入一抗(10~20μg/ml终浓度),4° C孵育30分钟。
2.用20倍体积PBE洗细胞一次,再加PBE(0.3ml/1×108细胞)充分混悬细胞后,加入相应二抗包被的超微磁珠,混匀后置8~15° C孵育10~15分钟。
3.将分离柱安装入磁场中,加入0.5ml PBE,在重力作用下自然流尽,以预处理分离柱。