核酸探针技术
核酸探针（又称基因探针，gene-probe）技术，是20世纪晚期在生物学领域中发展起来的一项新技术，除可用于病毒、细菌等微生物的快速诊断外，还可用于研究病毒基因在组织细胞中的存在，研究基因是以游离的形式还是以整合的方式与宿主细胞DNA结合，研究基因在细胞或组织中的定位等。
（一） 基本原理
Waston-Crick发现的DNA双螺旋模型已为大家所熟知。因为双股DNA是一种非常稳定的物质，于0.3mol/L NaOH 中暴露于60℃下，也不被破坏，在近100℃加热时，氢键虽可破坏，使DNA变成单股，但变性后的单股DNA还可结合在特定的载体如硝酸纤维素膜上，而标记的核酸（DNA或RNA）探针仍能与结合在膜上的单股DNA通过碱基互补配对原则形成氢键，又恢复成双股，此时，或通过放射自显影来观察X光片中的特定核酸片段的踪迹，或通过非放射性物质标记后，观察产生的特异颜色，以确定特定核酸片段的踪迹。使单股重新聚合成双股的过程称为退火或复性，不同来源DNA分子之间的退火，则形成杂交。应用这种杂交技术可用以检测和鉴定任何病毒或细菌的DNA分子等，核酸分子杂交可在DNA-DNA、DNA-RNA、RNA-RNA之间进行。根据杂交程度，可判断两个核酸分子之间核苷酸顺序同源性的多少。
（二） 核酸探针检验的特点
双股RNA比双股DNA更稳定，杂交后，经严格冲洗，可洗去非特异结合的探针，还可用RNA酶来降解未杂交的RNA，小的RNA分子比大的DNA分子更易扩散进入薄膜，在原位杂交中获得更大的信号与本底比率（signal to noise ratio），由此可见，用核酸探针检测具有很大的优点。
对于不易分离培养的微生物标本，及大量培养增殖后有“危险性”的病毒标本，均可用核酸探针直接检测。另外，对病毒子或病毒抗原太少的标本，不易用常规方法，包括电镜和血清学方法检测的标本，也可用核酸探针检测。本法还可用于对变异株病毒等的鉴定。
（三） 核酸探针的发展前景
近年来，随着人们对基因精细结构的深入细致的研究和DNA合成技术的发展，已经能够人工合成寡聚核苷酸片段作为探针来使用。这样由于DNA探针来源比较丰富，所以，可提高探针浓度来缩短杂交时间。Rubin等用Whatman 541滤纸代替硝酸纤维素膜进行菌落杂交试验，使操作过程方便简单，并且可取消预杂交。非放射性标记物——生物素，正日益引起人们极大的兴趣，是今后的发展方向。
咨询电话