一、核心处理流程
1. 样本类型与预处理
样本类型 | 处理方法（步骤） | 关键注意事项 |
血清 | 全血静置30分钟（室温），离心2000×g 10分钟（4℃），取上清 | 避免溶血；避免反复冻融（最多3次） |
血浆 | 抗凝全血（EDTA/肝素）离心3000×g 15分钟（4℃），取上层血浆 | 抗凝剂需与试剂盒兼容（详见说明书） |
细胞上清 | 直接离心1000×g 5分钟去除细胞碎片，上清分装保存 | 避免细胞裂解污染（可能干扰检测） |
组织匀浆 | 组织剪碎后液氮研磨，按比例加入PBS（含蛋白酶抑制剂）匀浆，离心12000×g 20分钟取上清 | 控制总蛋白浓度（建议1-10 mg/mL） |
尿液/唾液 | 离心2000×g 10分钟去除沉淀，上清加入0.1% BSA稳定 | 检测前需稀释（避免高盐/酸碱干扰） |
2. 保存与运输
l短期保存：4℃冷藏（≤24小时），避免微生物滋生。
l长期保存：-80℃分装冻存（避免反复冻融），使用冻存管标注批次/日期。
l运输：干冰（-80℃）或冷链箱（2-8℃），避免剧烈震荡。
二、质量控制要点
1.样本稀释
l按试剂盒要求梯度稀释（常用稀释液：PBS+1% BSA）。
l避免基质效应：高脂血/溶血样本需超速离心或过滤。
2.干扰物处理
l去除内源性酶：过氧化氢酶（HRP系统）或碱性磷酸酶（AP系统）抑制剂。
l去除类风湿因子：添加IgG阻断剂（针对血液样本）。
3.质控样本
l阳性/阴性对照：每板至少设置2孔。
l标准曲线：覆盖检测范围（建议R²≥0.99）。
三、常见问题与解决方案
问题 | 可能原因 | 解决方案 |
OD值异常高/低 | 样本过度稀释/未稀释 | 预实验优化稀释比例，检查标准曲线
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板内重复性差 | 离心不彻-底或气泡干扰 | 离心后静置5分钟，加样时避免产生气泡
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非特异性显色 | 交叉反应或封闭不充分 | 增加封闭时间（≥1小时），使用专用封闭剂 |
提示：不同品牌试剂盒可能存在差异，务必以说明书为准！
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