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盐析法与抗体的分离纯化

更新时间:2024-05-28   点击次数:94次

盐析法原理


蛋白质的溶解度在必定范围内随盐的浓度而改变。在低盐浓度下溶解度跟着盐浓度而添加,当盐浓度到达必定水平常,其溶解度又以不一样程度降低并先后分出。其原理是因为蛋白质分子的极性基团有着静电引力,当水中参加少数盐类时,盐类离子与水分子对蛋白质分子上极性基团的影响,使蛋白质在水中溶解度增大。但盐浓度添加到必定程度时,水的活度降低,蛋白质外表的电荷被中和,水化膜损坏,致使蛋白质分子互相集合而沉积。盐析法即是依据不一样蛋白质在必定浓度的盐溶液中溶解度不一样而到达互相别离的办法。


盐的挑选


蛋白质盐析常用中性盐,主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其间使用最-广的是硫酸铵,其长处是温度系数小,溶解度大(25℃时饱满溶解度为4.1mol/L,即767g/L)。在不一样的饱满硫酸铵溶液范围内,不一样蛋白质依次分出;并且硫酸铵价廉易得,分段效果好,不简单导致蛋白质变性。

硫酸铵浓溶液的pH常在4.5~5.5之间,市售的硫酸铵还常富含少数游离硫酸,pH值通常在4.5以下,须用氨水调节其pH值至7.0摆布。


盐析须知

1、盐的饱满度:盐的饱满度是影响蛋白质盐析的主要因素,不一样蛋白质的盐析请求盐的饱满度不一样。别离几个混合组分的蛋白质时,盐的饱满度常由低到高逐步添加,每呈现一种蛋白质沉积进行离心别离后,再继续添加盐的饱满度,使第二种蛋白质沉积。如用硫酸盐盐析别离血浆蛋白,当饱满度到达20%时,纤维蛋白原首先分出;饱满度增至28%~33%时,优球蛋白分出;饱满度到达33%~50%时,球蛋白分出;饱满度大于50%以上时,清蛋白分出,免疫球蛋白常在饱满度在33%开端分出。

2、pH值:在等电点时,蛋白质溶解度最小,简单沉积分出。故盐析时除个别特殊情况外,pH值常挑选在被别离的蛋白质等电点附近。

3、蛋白质浓度:在一样盐析条件下,蛋白质浓度越高越易沉积,高浓度虽对沉积有利,但浓度过高,也简单导致别的蛋白的共沉积,故有必要挑选恰当浓度,尽可能避免共沉积效果的搅扰。

4、温度:因为高浓度的盐溶液对蛋白质有必定保护效果,盐析操作一般可在室温下进行,但在使用某些中性盐进行盐析时,温度对盐溶解度的影响对比明显。

5、脱盐:蛋白质用盐析沉积别离后,常需求脱盐才干获得纯品。最-常用的脱盐办法是透析。通过透析袋表里的离子交换,最后使透析袋内溶液的盐浓度与外界相一致。