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人蛋白磷酸化酶2A(PP2A)的简易测试方法

更新时间:2022-07-01   点击次数:622次

【预期用途】

仅供科研使用,本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中蛋白磷酸化酶2A(PP2A)活性。


【检测原理】

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人蛋白磷酸化酶2A(PP2A)水平。用纯化的人蛋白磷酸化酶2A(PP2A)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入蛋白磷酸化酶2A(PP2A),再与HRP标记的蛋白磷酸化酶2A(PP2A)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的蛋白磷酸化酶2A(PP2A)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人蛋白磷酸化酶2A(PP2A)活性浓度。


【产品性能】

1、物理性能

试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装,无破损漏气(如有漏气,不影响使用)。

2、剂量反应曲线线性

标准品剂量反应曲线相关系数r值,大于等于0.9900。

3、检测范围

1.2U/L -45U/L。

4、灵敏度

检出剂量最小不能小于小于0.3U/L 。

5、精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV 表示。CV(%) = SD/mean×100

批内差:取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD 值。

批间差:选取3 个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定,每个样本使用同一试剂盒重复测定10 次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD 值。

批内差: CV<5.9%

批间差: CV<8.1%

6、回收率

7、线性

8、特异性

9、稳定性


操作步骤

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

8.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10-20分钟。

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。