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ELISA试剂盒HIV抗体检测操作要点

发布时间:2020-03-23   点击次数:564次

    ELISA试剂盒HIV抗体检测操作要点
    ELISA试剂盒HIV抗体检测是发现HIV感染的有效途径,ELISA法是艾滋病初筛试验室检测HIV抗体普遍使用的方法之一。具体操作过程中ELISA法的影响因素较多,稍有不慎就会降低实验的准确性。避免诸多影响因素、保证结果准确性,才能够充分发挥ELISA法的优点,经过多次实验的总结和分析,这篇文章分享了相关的经验。

    1 试剂的选择
    通常所使用的ELISA试剂盒或其它试剂,必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批检合格、临床评估质量优良,并且均在有效期内使用。不同批号试剂组分不得混用,过期的试剂一律不得使用,首先提升实验结果的可信度。

    2 ELISA试剂盒样品的采集与保存
    用于检测的标本应保持新鲜,标本的采集应尽量避免溶血,因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质,干扰结果,会出现假阳性;标本如果受细菌污染,会因菌体中含有内源性过氧化物酶而出现假阳性;混浊或有沉淀的血清样品应离心,待澄清后方可检测,避免对结果造成影响。
用于HIV抗体检测的血清或血浆样品应存放于-20 ℃以下,短期(1周内)进行检测的样品可存放于2 ℃~8 ℃。融解时应上下颠倒充分混匀,动作要轻缓,避免产生气泡。同时应注意避免样品反复冻融,否则会造成样品抗体效价降低,影响其结果。

    3 加样
    加样前应注意将微孔板条从冷藏环境中取出放置室温,待试剂平衡后方可使用,未用完者需放入有干燥剂的密封袋中保存。整个HIV抗体检测必须符合《全国艾滋病检测技术规范》,严格防止交叉感染。操作时必须戴手套、穿工作衣,严格执行消毒隔离制度。
加样要用微量移液器(要求准确性高并定期进行校正),按规定的量加入孔内,避免加在孔壁的边缘,垂直加样,不要使吸头碰到酶标板孔上的已包被的抗原,加样时尽量慢吸快放,同时注意不要溅出,避免产生气泡。
每次加样都要更换吸头,做到一样一吸头,防止发生交叉污染,干吸头预先在血清中抽吸3次,以便保证加样量的准确性。滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去*滴后再进行滴加,以免产生气泡。

    4 ELISA试剂盒温育
    抗原抗体反应需要在一定的温度下(zui适温度为37 ℃),经过一定的时间才能达到反应的平衡点。温育一般采用能使反应液温度迅速达到平衡的水育法,一种是放在水育箱的隔板上,另一种是放在温箱的湿盒内,水要浸至板条的1/3处,不可将板条叠加放置,以保证各板的温度平衡一致。

    5 洗板
    由于待检血清中可能有HIV病毒的存在,采用ELISA法进行检测HIV抗体时,尽量使用洗板机洗板,一方面可以确保检测人员的安全,另一方面可以防止环境污染。洗板在ELISA检测中是一个非常重要的环节,洗板的合格与否直接影响检测结果的准确性。因此,洗板时一定要先放好,洗涤开始时注意观察洗板机上的每个吸液针是否都一致地插入孔底,并且将孔内液体全部吸干,按说明书要求设置浸泡的时间以及洗涤的次数。洗涤结束后进行拍板,同时要用蒸馏水冲洗管道,避免由于洗液的结晶而造成管道堵塞。同时要注意各种ELISA试剂盒的洗涤液不可混用。

    6 ELISA试剂盒显色与观察结果
    按照说明书规定的时间、温度恒定、反应后终止,并在显色反应终止后立即用酶标仪进行比色。

    7 小结
    ELISA试剂盒在加液与混匀过程中不应产生气泡,否则会使测定的OD值偏高,易出现假阳性结果。

    ELISA法是艾滋病初筛试验室检测HIV抗体普遍使用的方法,选择合格的试剂和仪器,操作中严格按照ELISA试剂盒说明书要求实验,这样就能保证检测结果的准确性。

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