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人胰岛素自身抗体

更新时间:2022-08-11

简要描述:

上海恒远生物科技有限公司所销售的“人胰岛素自身抗体",品种多,质量好,灵敏度高,涉及的品牌有美国RD、RB、IBL 原装/分装等不同价格档次的盒子。可以带检测(为您节省时间)具体价格请。

型号:人IAA试剂盒96人份/48人份点击量:1483

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产品名称:人胰岛素自身抗体           
英文名称: Human insulin autoantibodies,IAA ELISA KIT

性状:液体     
适应症:科研     
规格:96人份/48人份     
贮藏:2-8℃     
检测方法:ELISA酶联免疫     
产品用途: For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免费代测服务.
试剂器材
  1. 试剂
  (1) 包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):
    NaCO31.59克 NaHCO3  2.93克  加蒸馏水至1000ml  
    (2) 洗涤缓冲液(PH7.4 PBS):0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4?12H2O 2.9克 NaCl  8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸馏水至1000ml
  (3) 稀释液:牛血清白蛋白(BSA) 0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等 血清与洗涤液配成5~10%使用。
  (4) 终止液(2M H2SO4):蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。
  (5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml 0.1M 柠檬酸(19.2克/L) 24.3ml 加蒸馏水50ml。
  (6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml无水乙醇) 0.5ml底物缓冲液(PH5.5) 10ml0.75%H2O2 32μl
  (7) ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物缓冲液(PH5.5) 1ml 3%H2O2 2μl
  (8) 抗原、抗体和酶标记抗体。
  (9) 正常人血清和阳性对照血清。
  2. 器材:
  (1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔,ELISA检测仪,50μl及100μl加样器,塑料滴头,小毛巾,洗涤瓶。
  (2) 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。
  (3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。
注意事项
  1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
  2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
  (1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
  (2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
  (3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
  (4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。

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