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很多人都不知道的ELISA操作秘诀!
点击次数:328 发布时间:2018-04-26

    在上一篇技术资讯中,上海恒远为大家介绍了ELISA试剂盒质量保证的重要条件,得到了不少客户的反应支持。昨日下午,我公司钱收到了技术部门欧阳总监发来的zui新技术研究,在这里分享给各位朋友们参考学习,下面一起来看看很多人都不知道的ELISA操作秘诀!
    

    有2种方法来检验试验的度:通常用变异系数来表示,①几个样品用ELISA法同时进行多次测定求出CV%;②不同时间对不同操作者对某几个样进行多次测定求出变异系数。CV是个体参数标准差与平均数的比率。
    

    S/X=CV,CV应低10%,不应大于10~15%。
    

     不论目测或分光光度计测定,均可作一个稀释度或一系列稀释度测定,一般常规诊断只用一个稀释度判断阳性或阴性就可以了,这样比较方便,现在推荐传染病的血清诊断用1:200一个稀释度。有些需要定量的,可作一系列稀释度测定。
     
记录结果有下列几种方法:
    1.“+”或“-”:所有超过规定的OD值(如OD,0.4)的标本均属阳性,此规定OD值是根据事先测定大量阴性标本所取得的,此规定值是阴性标本的上限。或者以一组阴性标本OD平均值加2~3个标准差作为阳性阈值。
    2.直接以OD值来表示,如0.4、0.7、1.2,OD值越大,阳性反应越强,但此数值是在固定实验条件下得到的结果,而且每次实验都要有参考标本作对照。
    3.以终点滴度表示:将标本作连续稀释,zui高稀释度能出现阳性反应者(即OD值仍大于阳性阈值),即为该标本的滴度。
    4.以“比值”表示:求出被检标本的OD值与一组阴性标本OD值的比值,例如为阴性标本的2倍或3倍,即为阳性,比值小于2.1而大于1.5为可疑,<1.5为阴性。
    测定标本OD值-空白OD值
    如在此测定时以空白校正“O”点。
    5.以“单位”来表示:在测定被检标本的同时,再测定一个含已知单位数的阳性参考血清,用不同稀释度作ELISA检测后,以OD值为纵坐标,单位数为横坐标,画出标准曲线。以后可根据被检标本的OD值,从曲线上找出相应的单位数,再乘于血清的稀释倍数,即可得出被检标本的单位数。
   

    作试验时的阴性参考血清zuihao不要显色,否则会对结果判断带来困难,特别在目测时,当阳性标本OD值>2.0时,应作适当稀释后再作测定。

    上海恒远小贴士:在ELISA试剂盒实验操作中,所用仪器如吸管、烧杯试管都要清洁,用于酶结合和底物的吸管和容器一定要分开。试剂要求标准化。

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