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Cys-C,小鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂;胱抑素CELISA试剂盒

更新时间:2022-08-27

简要描述:

Cys-C,小鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂;胱抑素CELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中小鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂;胱抑素C(Cys-C)的含量。

型号:点击量:628

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性能参数

使用前*阅读说明书。本酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

【工作原理】

。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA)。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

【每套试剂盒中内容】(96T)

材料 数量

标准品 96T(2vial)

预包被抗体的96孔板 96T(8×12)

生物素标记人ANG抗体 96T (1:100)

ABC(亲和素-过氧化物酶复合物) 96T (1:100)

样品稀释液 96T×2

抗体稀释液 96T×1

ABC稀释液 96T×1

TMB显色液A 96T×1

TMB显色液B 96T×1

TMB终止液 96T×1

ELISA洗涤液 96T×1(1:25)

【需要而未提供的试剂和器材】

1. 37℃恒温箱。

2. 标准规格酶标仪。

3. 自动洗板机。

4. 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。

5. 蒸馏水,容量瓶等

6. 干净的试管和Eppendof管。

【注意事项】

1. 从-20℃取出的试剂盒,在4℃解冻guoye。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀,避免解冻时出现的分层,否则会出现浓度不均一的现象。

2. 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。

3. 配制各种试剂时,切记混匀!

4. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。

5. 建议所有标准品、样本都做双份检测。

6. 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活!

7. 为免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和试管。

【洗板方法】

手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

【样品的准备和保存】

样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。

血清——用干净试管收集血液,室温凝固2小时或4℃guoye,离心1000×g 10分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

【样品稀释的一般原则】

用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的*检测范围。样品的稀释应有详细记录。

【试剂的准备和保存】

A. 标准品的稀释和使用:在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液,*溶解后做倍比稀释。

8稀释后的标准品在2小时内使用。

B.生物素标记抗体工作液:在使用前2小时内准备。

1.  根据每孔需要0.1ml计算总的用量(实际配制时应多配制0.1-0.2ml)。

2.按10ul生物素标记抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

C.亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)工作液的准备:在使用前1小时内准备。

1.根据每孔需要0.1ml计算总的用量(实配时应多配制0.1-0.2ml)。

2.按10ul亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

D. TMB显色工作液的准备:在使用之前30分钟,按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。

【操作程序】

1. 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。

2. 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。

3. 酶标板加上盖,37℃反应90分钟。

4. 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。

5. 将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。

6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次,每次浸泡1分钟左右。

7. 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。

8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次,每次浸泡1-2分钟左右。

9. 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液,37℃避光反应,反应过程中,要经常的观察,当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔差别不明显时,即可加入TMB终止液0.1ml/孔。(显色反应zui长不要超过30分钟)。

10. 用酶标仪在450nm测定O.D.值。

11. 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍,其实际浓度应该×N。

【操作程序总结】:

准备试剂,样品和标准品

加入准备好的样品和标准品,37℃反应90分钟

洗板2次,加入生物素化人ANG抗体工作液,37℃反应60分钟

洗板3次,加入ABC工作液,37℃反应30分钟

洗板5次,加入TMB显色液,37℃反应

加入TMB终止液

30分钟之内读OD值

计算标本待测因子含量

【特异性】: 系统和其它细胞因子无交叉反应。

【保存】: -20℃ [短期内(如两周)可4℃

【有效期】: 12个月(-777℃)。

【用途】: 用给我留言于体外定量分析液体标本

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